简要描述:人可溶性白细胞抗原G(sHLA-G)ELISA试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中可溶性白细胞抗原G(sHLA-G)的含量。
详细介绍
品牌 | YLKBIO | 货号 | YLK-5236E |
---|---|---|---|
规格 | 96T/48T | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 科研实验 | 应用领域 | 化工,生物产业 |
样本 | 血清、血浆及相关液体样本 | 适用物种 | 人、大鼠、小鼠、植物、动物等 |
检测方法 | 双抗体夹心法 | 保存条件 | 2-8℃ |
有效期 | 6个月 |
人可溶性白细胞抗原G(sHLA-G)ELISA试剂盒
(ELISA) 使用说明书
⚫人可溶性白细胞抗原G(sHLA-G)ELISA试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中可溶性白细胞抗原G(sHLA-G)的含量。
⚫ 有效期:6个月
⚫ 保存条件:2-8℃
⚫ 本试剂盒仅供科研使用,不得用于临床诊断
实验原理实验
人可溶性白细胞抗原G(sHLA-G)试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物/素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。
试剂盒组成
需要而未提供的试剂和器材
1. 酶标仪(450nm)
2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水
样品收集、处理及保存方法
1)血清 操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后1000×g 离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2)血浆 EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g 离心 30 分钟去除颗粒。
3)细胞上清液 1000×g 离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。
4)组织匀浆 将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g 离心 10 分钟,取上清液
5)保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在 37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
备注:
1. 标准品浓度依次为:80、40、20、10、5、2.5 U/L
2. 经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时,可用样本/稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
试剂准备
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
操作步骤
1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回 4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL;
3. 样本孔中加入待测样本 50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置 1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板 5 次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入终止液 50μL,15min 内,在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。
试剂盒安全性
1)避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2)实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3)不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
实验结果计算
以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。
注意事项
1)试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2)实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3)不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4)使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5)使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6)洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7)底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8)加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9)按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
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